生化培養(yǎng)箱發(fā)酵管內(nèi)裝有單倍或者三倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，并在內(nèi)部倒置有小玻璃管。每個樣品采用三個不同的水樣量來接種，同一接種的水樣量至少要有五管，然后將水樣再分別接到裝有乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的發(fā)酵管里，在37℃±0.5℃下培養(yǎng)24h±2h。
  生化培養(yǎng)箱的乳糖可以起到選擇的作用，因為很多細菌是不能夠發(fā)酵乳糖的，而大腸菌群能夠發(fā)酵乳糖并能夠產(chǎn)生酸產(chǎn)生氣。培養(yǎng)液中適當加入溴甲酚紫以作為酸度指示劑，細菌產(chǎn)酸后，培養(yǎng)液中原來的紫色會變成了黃色。
  生化培養(yǎng)箱產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管是表明試驗為陽性的，如果當?shù)构軆?nèi)產(chǎn)氣不是非常明顯，可輕拍發(fā)酵管，有小氣泡升起的時候既是為陽性。
復發(fā)酵實驗：
  用初發(fā)酵試驗陽性結果的生化培養(yǎng)箱的發(fā)酵管加以輕微振蕩，用3mm的接種環(huán)將培養(yǎng)物(2-3環(huán))轉接到EC培養(yǎng)液之中，在44.5℃±0.5℃下培養(yǎng)24h±2h(提高培養(yǎng)溫度可造成不利于來自自然環(huán)境的大腸菌群的生長)。培養(yǎng)后立即觀察，如果發(fā)酵管產(chǎn)氣則證實為糞大腸菌群陽性。